|
|
20.
多房棘球蚴感染诱导肝窦内皮细胞发生毛细血管化的动态研究
张仁杰, 谢俊, 卫繁娜, 莫筱瑾, 宋鹏, 蔡玉春, 卢艳, 孙家辉, 周魇, 林琳, 张颋, 陈木新
中国血吸虫病防治杂志
2024, 36 (1):
34-43.
DOI: 10.16250/j.32.1374.2023243
目的 观察泡型棘球蚴病发展过程中肝窦内皮细胞（liver sinusoidal endothelial cells, LSEC）毛细血管化现象及与肝纤维化的关系，为探索LSEC在泡型棘球蚴病所致肝损伤和肝纤维化发生和转归中的作用机制奠定基础。方法 取40只C57BL/6小鼠（6～8周龄），随机分为对照组和感染1、2、4周组，每组各10只。感染1、2、4周组每只小鼠经肝脏直视穿刺注射接种2 000个多房棘球蚴原头节，对照组用相同方法注射等量磷酸盐缓冲液。在感染后1、2、4周，取小鼠肝脏，经苏木精⁃伊红（hematoxylin⁃eosin, HE）染色后观察肝脏病理变化，经Masson三色染色后对染色阳性区域面积进行半定量分析以判断肝纤维化程度，采用免疫组织化学染色法评价α⁃平滑肌动蛋白（α⁃smooth muscle actin, α⁃SMA）和Ⅰ型胶原蛋白α1（collagen type I alpha 1, COL1A1）表达水平以判断肝星状细胞（hepatic stellate cell, HSC）活化和细胞外基质（extracellular matrix, ECM）沉积，用扫描电子显微镜观察LSEC表面窗孔。从小鼠肝脏中分离原代LSEC，用实时荧光定量PCR（real⁃time fluorescence quantitative PCR, qPCR）法检测LSEC标志基因稳定素（Stabilin）⁃1、Stabilin⁃2、Ehd3、CD209b、 GATA4、Maf mRNA表达水平。结果 多房棘球蚴感染2周后，可见小鼠肝脏局部肝小叶结构被破坏；感染4周后，小鼠肝脏可见多房棘球蚴囊泡，周围有肉芽肿组织包绕。Masson三色染色半定量分析结果显示，4组小鼠肝脏内胶原纤维比例差异有统计学意义（F = 26.060，P < 0.001），感染4周组小鼠肝脏内胶原纤维比例 [（11.29 ± 2.58）%] 较对照组增加（P < 0.001）。免疫组织化学染色结果显示，感染1、2周组小鼠肝脏内见少量HSC活化和ECM沉积；感染4周组小鼠肝组织中可见大量棕黄色α⁃SMA 和COL1A1聚集沉积在病变区域，并向周围扩散。半定量分析结果显示，4组小鼠肝脏内α⁃SMA和COL1A1表达水平差异均有统计学意义（F = 7.667、6.530，P 均 < 0.05），感染4周组小鼠肝脏内α⁃SMA [（7.13 ± 3.68）%]和COL1A1[（13.18 ± 7.20）%] 表达水平均较对照组增加（P 均< 0.05）。扫描电子显微镜结果显示，4组小鼠LSEC开窗频率和孔隙率差异均有统计学意义（F = 37.730、16.010，P 均 < 0.001），感染1 [分别为（1.22 ± 0.48）/μm2、（3.05 ± 0.91）%]、2周组 [分别为（3.47 ± 0.10）/μm2、（7.57 ± 0.23）%] 小鼠LSEC开窗频率和孔隙率均较对照组降低（P 均< 0.001）。4组小鼠LSEC平均窗孔直径差异有统计学意义（F = 15.330，P < 0.001），感染1 [（180.80 ± 16.42） nm]、2周组 [（161.70 ± 3.85） nm] 小鼠LSEC平均窗孔直径均较对照组增加（P 均 < 0.05）。4组小鼠LSEC中Stabilin⁃1、Stabilin⁃2、Ehd3、CD209b、GATA4、Maf mRNA表达水平差异均有统计学意义（F = 153.100、57.010、31.700、177.400、17.740、72.710，P均< 0.001）；与对照组相比，感染1、2、4周组小鼠上述基因相对表达量均降低（P均 < 0.001）。结论 多房棘球蚴感染可诱导小鼠LSEC发生毛细血管化，并使LSEC功能和表型标志基因表达水平降低；LSEC毛细血管化早于HSC活化及肝纤维化发生。
相关文章 |
多维度评价 |
评论（0）
|
|
苏公网安备32021102001651 苏ICP备11056399号-2
