中国血吸虫病防治杂志 ›› 2023, Vol. 35 ›› Issue (3): 251-257.
王欢,刘进,开力买·艾尼,郑俊楠,沈波,孙艳,周丹*
WANG Huan, LIU Jin, KAILIMAI Aini, ZHENG Junnan, SHEN Bo, SUN Yan, ZHOU Dan*
摘要: 目的 探讨血管紧张素转换酶(angiotensin⁃converting enzyme,ACE)在淡色库蚊(Culex pipiens pallens)生殖中的作用,为蚊媒种群控制靶标的选择提供科学依据。方法 淡色库蚊于2009年采集于山东省唐口县。选择羽化后72 h雌、雄蚊,采用实时荧光定量PCR(quantitative real⁃time reverse transcription PCR,qPCR)技术检测雄蚊及吸血前(0 h)、吸血后(24、48、72 h)受精雌蚊全身和生殖组织中ACE基因表达水平。随后,选择羽化0~4 h的雌、雄库蚊各150只,分别分为野生(wild type, WT)组、RNA干扰⁃阴性对照 (small interfering RNA⁃negative control group, siNC)组和RNA干扰⁃ACE (small interfering RNA⁃ACE group,siACE)组,每组50只。WT组淡色库蚊不作任何处理;siNC组和siACE组分别通过显微注射仪注射siNC和siACE至蚊血淋巴中,注射剂量为0.3 μg/只。利用qPCR技术验证各组敲低效率,并观察各组生殖表型。结果 羽化后72 h,雄蚊全身组织ACE表达量(5.467 ± 1.006)高于雌蚊(1.199 ± 0.241)(t = 5.835, P = 0.004);雄蚊生殖组织中ACE表达量最高(199.100 ± 24.429),为剩余组织(1.057 ± 0.340)的188.3倍(t = 6.602,P = 0.002)。吸血触发ACE在受精雌蚊全身组织中高表达,吸血后24 h(14.957 ± 2.815)达到表达量高峰,为未吸血时(1.009 ± 0.139)的14.8倍(P = 0.002);雌蚊吸血后卵巢中ACE转录水平在卵黄合成期持续升高,在吸血后48 h(5.500 ± 0.734)达高峰,是未吸血雌蚊(1.072 ± 0.178)的5.1倍(P = 0.002)。靶向ACE的小RNA干扰导致siACE组雌蚊中ACE表达量(0.430 ± 0.070)较siNC组(1.002 ± 0.070)降低57.2%(P = 0.001),siACE组雄蚊ACE表达量(0.588 ± 0.067)较siNC组(1.008 ± 0.131)降低41.1%(P = 0.016)。敲低ACE导致siACE组雌蚊产卵量[(94.000 ± 27.386)只]较siNC组[(180.800 ± 27.386)只]降低48.0%(P < 0.001);与siACE组雄蚊交配的野生雌蚊产卵量[(104.500 ± 20.965)只]较siNC组[(190.050 ± 10.698)只]降低45.0%(P < 0.001)。 结论 ACE表达降低可同时抑制雌、雄蚊虫生殖力,ACE可作为蚊媒种群抑制的潜在靶点。
中图分类号: