中国血吸虫病防治杂志 ›› 2017, Vol. 29 ›› Issue (4): 464-467,474.
刘烨1|2|赵桂华1*|尹昆1|王洪法1|肖婷1|刘功振1|仲维霞1|崔勇1
LIU Ye1 |2| ZHAO Gui-hua1*| YIN Kun1| WANG Hong-fa1| XIAO Ting1| LIU Gong-zhen1| ZHONG Wei-xia1| CUI Yong1
摘要: 目的 建立猫肠上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IECs)培养体系,构建其酵母双杂交cDNA文库,为筛选弓形虫毒性因子在终末宿主的互作蛋白奠定基础。方法 分别采用组织块法以及低浓度胶原蛋白酶Ⅺ和中性蛋白酶Ⅰ联合消化法进行猫IECs的原代培养,通过形态学观察及细胞免疫组织化学方法鉴定后提取mRNA,运用SMART技术合成cDNA第一链,以LD?PCR扩增获得双链cDNA(ds cDNA),通过同源重组方法在酵母菌株Y187中构建猫IECs的cDNA文库,计算文库的容量,以酵母菌液PCR检测插入片段的大小分布。结果 两种培养方法效果表明酶联合消化法更为有效。本研究建立了连续培养猫IECs体系,培养出高纯度的猫IECs,用其构建的cDNA文库容量为1.1×106,滴度为2.8×109 cfu/ml,插入片段大小在0.5~2.0 kb之间。结论 培养的原代猫IECs构建的cDNA文库符合酵母双杂交筛选互作因子标准,这为筛选弓形虫终末宿主的毒性因子互作蛋白奠定了基础。
中图分类号: