中国血吸虫病防治杂志 ›› 2023, Vol. 35 ›› Issue (3): 244-250.
韩雪1,闭香连1,赵红英2,石云良1,温晴1,吕佳音1,孙嘉月1,傅晓茵1*,刘登宇1*
HAN Xue1, BI Xianglian1, ZHAO Hongying2, SHI Yunliang1, WEN Qing1, LÜ Jiayin1, SUN Jiayue1, FU Xiaoyin1*, LIU Dengyu1*
摘要: 目的 采用生物信息学方法预测粪类圆线虫丝氨酸蛋白酶抑制剂1(Strongyloides stercoralis serine protease inhibitor 1,Ss⁃SRPN⁃1)蛋白结构和抗原表位,构建原核表达载体并进行重组蛋白表达,为阐明Ss⁃SRPN⁃1蛋白功能奠定基础。方法 自NCBI数据库中获取Ss⁃SRPN⁃1氨基酸序列,使用ExPASY、SWISS⁃MODEL和Protean等生物信息学软件对Ss⁃SRPN⁃1蛋白的理化性质、结构和抗原表位等进行预测。根据Ss⁃SRPN⁃1核苷酸序列设计引物,以粪类圆线虫感染性三期幼虫DNA为模板,对Ss⁃SRPN⁃1基因进行扩增、克隆和测序。将重组质粒pET28a(+)/Ss⁃SRPN⁃1转入大肠埃希菌BL21(DE)中诱导重组Ss⁃SRPN⁃1蛋白表达,纯化重组蛋白并进行Western blotting及质谱鉴定。结果 生物信息学分析显示,Ss⁃SRPN⁃1蛋白由372个氨基酸组成,分子式为C1948H3046N488O575S16,是一种稳定的亲水性蛋白,预测其亚细胞定位在细胞外;预测该蛋白存在11个优势B细胞抗原表位、20个T细胞表位。成功扩增长度为1 119 bp的Ss⁃SRPN⁃1基因,构建了重组质粒pET28a(+)/Ss⁃SRPN⁃1并转化至大肠埃希菌BL21(DE)进行表达,表达的重组Ss⁃SRPN⁃1蛋白分子量约43 kDa,鉴定结果显示该重组蛋白为Ss⁃SRPN⁃1蛋白。结论 成功表达了重组Ss⁃SRPN⁃1蛋白,预测该蛋白可作为一种潜在的粪类圆线虫病疫苗候选分子。
中图分类号: