中国血吸虫病防治杂志 ›› 2022, Vol. 34 ›› Issue (4): 378-.
郑佳1,张东军2,赵商岐1,李艳敏1,周彦霞1,周文涛3,周晓涛1*
ZHENG Jia1, ZHANG Dong⁃jun2, ZHAO Shang⁃qi1, LI Yan⁃min1, ZHOU Yan⁃xia1, ZHOU Wen⁃tao3, ZHOU Xiao⁃tao1*
摘要: 目的 对细粒棘球蚴病重组多表位疫苗EgG1Y162⁃2(4)进行原核表达并初步鉴定。方法 利用免疫信息学方法对基于接头序列“GSGGSG”的细粒棘球蚴病重组多表位疫苗EgG1Y162⁃2(4)进行三维结构建模,分析其结构变化并评估该疫苗抗原性。通过EcoR I和Sal Ⅰ双酶切构建pET30a⁃EgG1Y162⁃2(4)重组质粒,将重组质粒转化入感受态细胞,利用异丙基⁃β⁃D⁃硫代半乳糖苷(isopropyl⁃β⁃D⁃thiogalactoside, IPTG)诱导蛋白表达, Western blotting鉴定原核表达蛋白产物,并应用细粒棘球蚴病患者及健康人血清分析重组蛋白抗原性。 结果 构建的重组疫苗EgG1Y162⁃2(4)三维结构串联的4个EgG1Y162⁃2蛋白均能独立、有效表达且具有良好抗原性。重组质粒pET30a⁃EgG1Y162⁃2(4)在0.2 mmol/L IPTG 37 ℃诱导4 h条件下,上清中目的蛋白表达量最高,使用60 mmol/L咪唑洗脱的蛋白成分较纯。Western blotting分析发现,重组多表位蛋白HIS⁃EgG1Y162⁃2(4)在约39 kDa位置处出现条带,且该蛋白可被细粒棘球蚴病患者血清识别。结论 成功构建了细粒棘球蚴重组疫苗EgG1Y162⁃2(4),为研究细粒棘球蚴病重组多表位疫苗奠定了基础。
中图分类号: