基于重组酶介导核酸等温扩增技术的日本血吸虫特异性基因片段核酸试纸条检测方法的建立

中国血吸虫病防治杂志（中英文） ›› 2021, Vol. 33 ›› Issue (4): 334-.

基于重组酶介导核酸等温扩增技术的日本血吸虫特异性基因片段核酸试纸条检测方法的建立

叶钰滢1，赵松1*，刘燕红2，张键锋1，熊春蓉1，应清界2，杨坤1*

1 国家卫生健康委员会寄生虫病预防与控制技术重点实验室、江苏省寄生虫与媒介控制技术重点实验室、江苏省血吸虫病防治研究所（无锡214064）；2江苏省奇天生物科技有限公司

出版日期:2021-08-30 发布日期:2021-08-30
作者简介:叶钰滢，女，硕士研究生。研究方向：血吸虫病分子诊断
基金资助:
江苏省国际科技合作项目（BZ2020003）；江苏省重点研发计划（社会发展）面上项目（BE2019755）；江苏省省属公益院所能力提升项目（BM2018020⁃3）

Establishment of a nucleic acid dipstick test for detection of Schistosoma japonicum specific gene fragments based on the recombinase⁃aided isothermal amplification assay

YE Yu⁃Ying1, ZHAO Song1*, LIU Yan⁃Hong2, ZHANG Jian⁃Feng1, XIONG Chun⁃Rong1, YING Qing⁃Jie2, YANG Kun1*

1 Key Laboratory of National Health and Family Planning Commission on Parasitic Disease Control and Prevention, Jiangsu Provincial Key Laboratory on Parasite and Vector Control Technology, Jiangsu Institute of Parasitic Diseases, Wuxi 214064, China; 2 Jiangsu Qitian Gene Technology Co., Ltd., China

Online:2021-08-30 Published:2021-08-30

摘要/Abstract

摘要： 目的　结合重组酶介导核酸等温扩增技术（recombinase⁃aided isothermal amplification assay，RAA）和核酸试纸条建立一种快速检测日本血吸虫特异性基因片段的方法。方法　以日本血吸虫SjG28基因片段作为靶序列，设计并合成引物、荧光探针，建立日本血吸虫核酸试纸条检测方法。通过检测不同拷贝数的含SjG28基因片段的重组质粒和不同浓度的日本血吸虫成虫基因组DNA，对该方法敏感性进行评价；通过检测华支睾吸虫、曼氏血吸虫、十二指肠钩口线虫、埃及血吸虫、巴贝斯虫和卫氏并殖吸虫基因组DNA，对该方法特异性进行评价。结果　以重组质粒为模板，建立的日本血吸虫特异性基因片段核酸试纸条检测方法最低检测限为10拷贝/μL；以成虫基因组DNA为模板，最低检测限为1 pg/μL。该方法检测华支睾吸虫、曼氏血吸虫、十二指肠钩口线虫、埃及血吸虫、巴贝斯虫和卫氏并殖吸虫基因组DNA结果均为阴性。结论　本研究结合RAA技术和核酸试纸条建立了一种可快速、简便、可视化检测日本血吸虫特异性基因片段的核酸试纸条法。

关键词: 日本血吸虫, 核酸试纸条, 重组酶介导的等温扩增, 核酸检测, SjG28基因

Abstract: Objective　To develop a rapid test for detection of Schistosoma japonicum specific gene fragments based on the recombinase⁃aided isothermal amplification assay (RAA) and nucleic acid dipstick test. Methods　The S. japonicum SjG28 gene fragment was selected as the target gene fragment, and the primers and fluorescent probe were designed and synthesized. Then, a S. japonicum nucleic acid dipstick test was established. The sensitivity of this dipstick test was evaluated by detecting different copies of recombinant plasmids containing the S. japonicum SjG28 gene fragment and different concentrations of genomic DNA from adult worms of S. japonicum, and the specificity of the dipstick test was evaluated by detecting the genomic DNA from Clonorchis sinensis, S. mansoni, Ancylostoma duodenale, S. haematobium, Babesia and Paragonimus westermani. Results　The S. japonicum nucleic acid dipstick test based on the S. japonicum SjG28 gene fragment showed the minimum detectable limit of 10 copies/μL of the recombinant plasmid containing the S. japonicum SjG28 gene fragment and the minimum detectable limit of 1 pg/μL of S. japonicum genomic DNA, and the dipstick assay tested negative for the genomic DNA from C. sinensis, S. mansoni, A. duodenale, S. haematobium, Babesia and P. westermani. Conclusion　A rapid, simple, and visualized assay is established for detection of S. japonicum specific gene fragments based on RAA and nucleic acid dipstick test.

Key words: Schistosoma japonicum, Nucleic acid dipstick, Recombinase?aided amplification, Nucleic acid detection, SjG28 gene

中图分类号:

R383.24

叶钰滢, 赵松, 刘燕红, 张键锋, 熊春蓉, 应清界, 杨坤. 基于重组酶介导核酸等温扩增技术的日本血吸虫特异性基因片段核酸试纸条检测方法的建立[J]. 中国血吸虫病防治杂志（中英文）, 2021, 33(4): 334-.

YE Yu⁃Ying, ZHAO Song, LIU Yan⁃Hong, ZHANG Jian⁃Feng, XIONG Chun⁃Rong, YING Qing⁃Jie, YANG Kun. Establishment of a nucleic acid dipstick test for detection of Schistosoma japonicum specific gene fragments based on the recombinase⁃aided isothermal amplification assay[J]. Chinese Journal of Schistosomiasis Control, 2021, 33(4): 334-.

[1]	李博, 李石柱, 许静, 郭照宇, 吴忠道, 吴海玮, RICHTER Joachim, 宁安, 闻礼永, 张世清, 林丹丹, 杨坤, 华海涌, 孙希, 元艺, 李华忠, 杨米扬, 贺德慧, 曹承斌, 吴斌, 朱龙强, 颜飞雄, 郑茂, 王洪波, 潘舸, 田英, 李俊, 李卫湘, 段娟, 龚纯, 任光辉, 师颖瑞, 周晓农 . 日本血吸虫病肝纤维化超声诊断路径的专家共识[J]. 中国血吸虫病防治杂志（中英文）, 2025, 37(6): 569-579.
[2]	吕超, 许晓娟, 李佳佳, 冯婷, 朱海, 李宜锋, 徐玲, 冯志宏, 江会文, 邹小青, 魏文俊, 秦志强, 洪炀, 张世清, 许静. 消除阶段重点地区野鼠血吸虫感染率调查[J]. 中国血吸虫病防治杂志（中英文）, 2025, 37(5): 475-481, 523.
[3]	龙娟, 马浪, 宗红英, 周志鹏, 严浩, 赵琴平. 微卫星位点标记数量对日本血吸虫种群遗传多样性研究的影响[J]. 中国血吸虫病防治杂志（中英文）, 2025, 37(3): 239-246.
[4]	余新刚, 袁凯健, 李奕龙, 穆宣儒, 许辉, 李巧雨, 曾文静, 傅志强, 洪炀. 日本血吸虫热休克同源蛋白20生物学特性初步研究[J]. 中国血吸虫病防治杂志（中英文）, 2025, 37(3): 294-303.
[5]	刘卓凡, 谢浩, 孙晓亮, 夏涛, 郭君慧. 蜱传脑炎病毒感染检测技术研究进展[J]. 中国血吸虫病防治杂志（中英文）, 2025, 37(2): 209-216.
[6]	宋静, 张宗亚, 沈美芬, 周济华, 李春英, 杨早改, 董毅, 杜春红. 日本血吸虫和中华血吸虫尾蚴外部形态及运动方式比较[J]. 中国血吸虫病防治杂志（中英文）, 2024, 36(4): 384-387.
[7]	闫书宁, 杨硕, 杨汉银, 辛怡, 徐斌, 胡薇, 卢艳, 郑彬. CRISPR/Cas系统在寄生虫基因编辑与核酸检测中的应用进展[J]. 中国血吸虫病防治杂志（中英文）, 2024, 36(3): 314-320.
[8]	李银龙, 李琴, 林伟娜, 冯婷, 秦志强, 曹淳力, 李石柱, 许静. 日本血吸虫感染小鼠慢性致病阶段肝脏中差异表达长非编码RNA筛选及功能分析[J]. 中国血吸虫病防治杂志（中英文）, 2024, 36(2): 137-147.
[9]	许晓娟, 陈雪峰, 吴凡, 吴晨阳, 刘婷, 代波, 汪天平, 张世清. 不同病原学方法检测野鼠日本血吸虫感染效果比较 [J]. 中国血吸虫病防治杂志（中英文）, 2023, 35(6): 573-582,589.
[10]	薛媛, 杨小迪, 张华平, 张婷婷, 陈伟豪, 常欣悦, 王艳红. 重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂对小鼠急性肝衰竭相关急性肾损伤的保护作用[J]. 中国血吸虫病防治杂志（中英文）, 2023, 35(4): 331-339.
[11]	张乔乔, 赵松, 叶钰滢, 毕念念, 王鑫瑶, 张键锋, 李伟, 杨坤. 尿液中外源日本血吸虫小分子DNA片段提取方法的建立与评价[J]. 中国血吸虫病防治杂志（中英文）, 2023, 35(1): 15-.
[12]	李梦茹, 秦志强, 殷堃, 郑彬. CRISPR/Cas系统在病原体核酸检测中的应用进展 [J]. 中国血吸虫病防治杂志（中英文）, 2023, 35(1): 98-.
[13]	李其凤, 宋丽君, 杨莹莹, 董盼盼, 梅丛进, 李溢鑫, 张键锋, 熊春蓉, 余传信, 杨坤. 重组日本血吸虫虫卵核糖核酸酶SjCP1412体外抑制肝星状细胞LX-2活化作用的研究[J]. 中国血吸虫病防治杂志（中英文）, 2022, 34(6): 566-.
[14]	吴家玲, 呼明闯, 王旗, 刘道华, 章乐生, 朱磊, 孙成松, 操治国, 汪天平. 安徽省山丘地区和湖沼地区日本血吸虫致病性及成虫基因表达谱差异[J]. 中国血吸虫病防治杂志（中英文）, 2022, 34(6): 580-.
[15]	战廷正, 马会会, 李青, 唐莉莉, 何姗姗, 唐泽丽, 夏超明. 白细胞介素9促进日本血吸虫感染小鼠肝星状细胞激活[J]. 中国血吸虫病防治杂志（中英文）, 2022, 34(5): 514-.