刚地弓形虫硫氧还蛋白基因的克隆 表达及鉴定

中国血吸虫病防治杂志（中英文） ›› 2016, Vol. 28 ›› Issue (3): 289-292.

刚地弓形虫硫氧还蛋白基因的克隆表达及鉴定

张梓岗1，陈小美1，苏丹华1，刘原1，付涛1，端木家苗1，吴亮1，姜旭淦1，陈盛霞1*，曹建平2

1 江苏大学医学院（镇江 212013）； 2 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所

出版日期:2016-06-13 发布日期:2016-06-14
通讯作者: 陈盛霞
作者简介:张梓岗，男，硕士研究生。研究方向：弓形虫致病机制
基金资助:
国家自然科学基金（81301453）；卫生部寄生虫病原与媒介生物学重点实验室开放课题（WSBKTKT201302）；中国博士后科学基金特别资助（2015T80518）；中国博士后科学基金（2014M561598）；江苏省博士后科研计划（1402171C）；江苏大学高级人才启动基金（13JDG023、 13JDG127）

Cloning, fusion expression and identification of thioredoxin encoding gene from Toxoplasma gondii

ZHANG Zi-gang1 ，CHEN Xiao-mei 1 ，SU Dan-hua1 ，LIU Yuan1 ，FU Tao1 ，DUAN-MU Jia-miao1 ，WU Liang1 ，JIANG Xu-gan1 ， CHEN Sheng-xia1* ，CAO Jian-ping2

1 School of Medicine，Jiangsu University，Zhenjiang 212013，China；2 National Institute of Parasitic Diseases，Chinese Center for Disease Control and Prevention，China

Online:2016-06-13 Published:2016-06-14
Contact: CHEN Sheng?xia

摘要/Abstract

摘要： 目的目的克隆刚地弓形虫硫氧还蛋白（Thioredoxin，Trx）基因，构建原核表达载体，通过诱导表达和纯化蛋白，免疫家兔制备多克隆抗体。方法方法采用PCR技术扩增刚地弓形虫Trx基因，克隆至原核表达载体pET?28a （+）中，转化大肠埃希菌（E. coli） Rosetta，用IPTG诱导目的蛋白表达，采用镍亲和层析法获得纯化蛋白并免疫家兔制备多克隆抗体。利用 Western blotting技术鉴定多克隆抗体的特异性。结果结果成功从刚地弓形虫 cDNA 中扩增出 Trx 目的基因，构建了 Trx/pET?28a （+）重组质粒，获得抗Trx重组蛋白的多克隆抗体。Western blotting技术检测出弓形虫Trx蛋白的特异性条带。结论结论用制备的兔抗Trx多克隆抗体能检测弓形虫Trx在速殖子内的表达，为进一步深入研究刚地弓形虫Trx功能奠定了基础。

关键词: 刚地弓形虫, 硫氧还蛋白, 克隆, 原核表达, 鉴定, 多克隆抗体

Abstract: Objective Objective To clone and express the thioredoxin（Trx）from RH strain tachyzoites of Toxoplasma gondii，estab? lish the prokaryotic expression vector and purify the recombinant protein，then produce the polyclonal anti?Trx antibody in rab? bits. Methods Methods Trx fragment was amplified by PCR and cloned into the pET?28a （+） vector，and the recombinant protein was in? duced with IPTG and purified by Ni?NTA affinity chromatography. The polyclonal antibody specificity was detected by Western blotting. Results Results The trx gene was amplified from T. gondii cDNA by PCR. The recombinant plasmid trx/pET?28a （+）was use? fully constructed，and the recombinant TRX protein was expressed and purified. The TRX polyclonal antibody was also ob? tained. The specific band of TRX was detected by Western blotting. Conclusion Conclusion Western blotting can detect the specificity of polyclonal anti?Trx antibody，which will facilitate the biological functions of Trx.

Key words: Toxoplasma gondii, Thioredoxin, Cloning, Prokaryotic expression, Identification, Polyclonal antibody

张梓岗，陈小美，苏丹华，刘原，付涛，端木家苗，吴亮，姜旭淦，陈盛霞，曹建平. 刚地弓形虫硫氧还蛋白基因的克隆表达及鉴定[J]. 中国血吸虫病防治杂志（中英文）, 2016, 28(3): 289-292.

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