中国血吸虫病防治杂志 ›› 2021, Vol. 33 ›› Issue (5): 470-.
邓珺1, 2, 3,黄登亮3,张耀刚3,李建华3,侯静3,江源3,田美媛3,孙莉3,张涛1, 3, 张轩1, 2, 3,董允1, 3,樊海宁3,马艳艳2, 3*
DENG Jun1,2,3, HUANG Deng⁃Liang3, ZHANG Yao⁃Gang3, LI Jian⁃Hua3, HOU Jing3, JIANG Yuan3, TIAN Mei⁃Yuan3, SUN Li3, ZHANG Tao1,3, ZHANG Xuan1,2,3, DONG Yun1,3, FAN Hai⁃Ning3, MA Yan⁃Yan2,3*
摘要: 目的 观察多房棘球蚴感染后巨噬细胞线粒体代谢功能变化,为探索多房棘球蚴病发病机制提供依据。方法 根据处理方法不同设培养组和对照组,其中培养组按照500∶1比例将小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)与2 000个多房棘球蚴共培养,对照组RAW264.7细胞不做任何处理。根据培养时间不同,将对照组和培养组分为24 h 对照组、72 h对照组、24 h 培养组、72 h 培养组。采用MitoTracker® Deep Red FM 线粒体深红色荧光探针标记线粒体并应用Cytation5细胞成像微孔板检测系统检测细胞线粒体平均荧光强度,用实时荧光定量PCR检测线粒体DNA拷贝数(mitochondrial DNA copy number,mtDNA⁃CN),采用Seahorse细胞能量代谢系统实时监测线粒体能量代谢功能,采用流式细胞术检测线粒体活性氧及线粒体膜电位。结果 24 h(15 341 ± 2 532 vs. 17 823 ± 3 429;t = 6.379,P < 0.01)、72 h(18 102 ± 3 505 vs. 21 511 ± 5 144;t = 17.680,P < 0.01)培养组线粒体平均荧光强度均较其相应对照组显著降低。72 h培养组mtDNA⁃CN(3.23 × 109 ± 1.78 × 107)较其对照组(4.39 × 109 ± 3.70 × 107)显著降低(t = 8.85,P < 0.001)。实时线粒体能量代谢功能分析结果示,24 h[(241.70 ± 73.13) pmol/min vs. (69.05 ± 52.30) pmol/min;t = 7.89,P < 0.01)]、48 h [(249.50 ± 42.06) pmol/min vs. (60.28 ± 40.66) pmol/min;t = 8.64,P < 0.01]培养组较相应对照组细胞耗氧率升高,且48 h培养组细胞外酸化率较其对照组增高[(111.60 ± 17.49) mpH/min vs.(35.05 ± 7.57) mpH/min;t = 16.90,P < 0.01];72 h培养组较其对照组线粒体活性氧平均荧光强度显著升高(58 264 ± 10 087 vs. 4 307 ± 97;t = 12.930,P < 0.01)、线粒体膜电位显著降低(9.833% ± 2.285% vs. 2.667% ± 0.208%;t = 6.645,P < 0.01)。结论 多房棘球蚴感染可损伤巨噬细胞线粒体功能、抑制巨噬细胞氧化磷酸化过程而使糖酵解增强,巨噬细胞代谢状态改变可能是多房棘球蚴病发生和发展的机制之一。
中图分类号: