中国血吸虫病防治杂志 ›› 2020, Vol. 32 ›› Issue (2): 181-.
谢红1,2,褚亮3,吴令琴2,4,范星宇2,王浦2,马思雨2,郑冬雪2,李坤龙2,陈兴智1,2*,杨小迪1,2*
XIE Hong1, 2, CHU Liang3, WU Ling-Qin2, 4, FAN Xing-Yu2, WANG Pu2, MA Si-Yu2, ZHENG Dong-Xue2, LI Kun-Long2, CHEN Xing-Zhi1, 2*, YANG Xiao-Di1, 2*
摘要: 目的 探讨重组旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制(rTs?Cys)对体外诱导骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)极化的调控作用。方法 获取BMDMs并培养至条件培养基中,7 d后获取成熟BMDMs。将此BMDMs分为阴性对照组(A组)、阳性对照组(B组)、单独重组蛋白组(C组)和蛋白共培养组(D组),A组细胞给予10 ng/mL γ?干扰素(IFN?γ)和100 ng/mL 脂多糖(LPS)刺激,B组细胞给予10 ng/mL白细胞介素(IL)?4和10 ng/mL IL?10刺激,C组细胞给予1 μg/mL rTs?Cys干预,D组细胞给予1 μg/mL rTs?Cys、10 ng/mL IFN?γ及100 ng/mL LPS刺激。干预24 h后,收集细胞及培养上清,采用流式细胞术检测各组细胞中F4/80+、CD11b+、CD206+和CD11c+细胞比例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中IL?6、肿瘤坏死因子?α(TNF?α)、IL?10及转化生长因子?β(TGF?β)水平,采用免疫荧光染色鉴定CD86+、CD206+表型。结果 流式细胞术检测结果显示,4组F4/80+ CD11b+CD11c+细胞比例差异具有统计学意义(F = 46.184,P < 0.001),C组及D组F4/80+ CD11b+ CD11c+细胞比例均较A组显著降低(P均 < 0.001);4组F4/80+ CD11b+ CD206+细胞比例差异具有统计学意义(F = 11.032,P < 0.01),C组及D组F4/80+ CD11b+ CD206+细胞比例均较A组显著升高(P均 < 0.01)。免疫荧光染色显示,C组及D组CD206+表达水平较A组显著上调,两组CD86+表达水平较A组下降。ELISA检测结果显示,4组细胞培养上清液中IL?6(F = 3.950,P < 0.001)和TNF?α水平(F = 205.827,P < 0.001)差异均有统计学意义;C组及D组IL?6和TNF?α水平均较A组显著下降(P均 < 0.05)。4组细胞培养上清液中IL?10(F =8.274,P < 0.001)和TGF?β水平(F = 13.559,P < 0.01)差异均有统计学意义;C组IL?10、TGF?β水平较A组显著增加(P均?0.01);D组TGF?β水平较A组显著增加(P?0.05),但IL?10水平较A组无明显变化(P?>?0.05)。结论 rTs?Cys体外能诱导BMDMs向抗炎特性的M2方向极化,并抑制M1型巨噬细胞活化。
中图分类号: