中国血吸虫病防治杂志 ›› 2018, Vol. 30 ›› Issue (2): 155-160.
曹得萍1|2*|张耀刚2|李超群1|刘佳1|姜博璠1
CAO De-ping1| 2*| ZHANG Yao-gang2| LI Chao-qun1| LIU jia1| JIANG Bo-fan1
摘要: 目的 通过原核表达获得细粒棘球绦虫转酮醇酶(TK)表达产物,分析其作为棘球蚴病诊断抗原分子的价值。方法 PCR扩增TK基因,克隆至原核载体pMD19?EgTK,随后亚克隆至表达载体pET?28a,构建目的基因TK原核表达质粒pET?28a(+)?EgTK,转入大肠埃希菌BL21,分离纯化蛋白,经SDS?PAGE、Western blotting鉴定后,收集细粒棘球蚴病(CE组)、多房棘球蚴病(AE组)患者及健康人(健康组)血清,以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测重组蛋白作为诊断抗原的价值。结果 成功构建pET?28a(+)?EgTK质粒,经SDS?PAGE和Western blotting分析,EgTK蛋白在70 kDa处出现条带,与理论值一致。ELISA显示,CE组、AE组和健康组血清反应吸光度A450值间差异有统计学意义(F = 44.47,P < 0.01),CE组(1.46±0.41)、AE组A450值(1.28±0.29)高于健康组(0.66±0.23)(P < 0.05),但CE组和AE组间A450值差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 重组TK分子可较好地区分棘球蚴病患者和非棘球蚴病患者,但无法区分细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患者。
中图分类号: