中国血吸虫病防治杂志 ›› 2014, Vol. 26 ›› Issue (4): 420-.
徐海丰|徐朋飞|王克霞*|李朝品
XU Hai-feng| XU Peng-fei| WANG Ke-xia* |LI Chao-pin
摘要: 目的 目的 构建粉尘螨1类变应原 (Der f 1) 的T和B细胞表位嵌合基因原核表达载体。方法 方法 将Der f 1包含的5个 T细胞表位 (T1~T5) 和6个B细胞表位 (B1~B6), 以B1?T1?B2?T2?B3?T3?B4?T4?B5?T5?B6和B1?B2?B3?B4?B5?B6?T1?T2? T3?T4?T5连接方式直接合成表位嵌合基因, 并分别命名为Der f 1A和Der f 1B。构建原核表达重组质粒pET?28a (+) ?Der f 1A和pET?28a (+) ?Der f 1B, 双酶切及测序验证的阳性克隆转化到E.coli BL21 (DE3) 后诱导表达。SDS?PAGE分析表达 产物后进行纯化, 并进行Western blotting鉴定。ELISA法检测嵌合蛋白对粉尘螨过敏患者血清IgE抗体的结合力。结 结 果 果 双酶切及测序结果表明, 成功构建了原核表达重组质粒pET?28a (+) ?Der f 1A和pET?28a (+) ?Der f 1B; SDS?PAGE分 析表明, Der f 1A和Der f 1B诱导并纯化成功, Western blotting结果进一步证实纯化了Der f 1A和Der f 1B嵌合蛋白。与 Der f 1相比, Der f 1A和Der f 1B嵌合蛋白与粉尘螨过敏患者血清IgE抗体的结合能力显著降低 (P均<0.05), 但Der f 1A 和Der f 1B间差异无统计学意义 (P>0.05)。结论 结论 成功表达了Der f 1的T和B细胞表位嵌合蛋白, 为粉尘螨过敏的特异 性免疫治疗奠定了基础。
中图分类号: