中国血吸虫病防治杂志 ›› 2011, Vol. 23 ›› Issue (4): 412-418.
宋丽君1|余传信1*|谢曙英2|殷旭仁1|钱春艳1|王玠1|张伟1|柯雪丹1
Song Li-jun1, Yu Chuan-xin1*, Xie Shu-ying2, Yin Xu-ren1, Qian Chun-yan1, Wang Jie1, Zhang Wei1, Ke Xue-dan1
摘要:
目的 制备具有生物活性的重组日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(SjTGR)硒蛋白。方法 采用PCR法,在SjTGR基因开放阅读框的末端融合大肠杆菌硒蛋白转译的硒代半胱氨酸插入序列以构建一个嵌合基因,将此嵌合基因亚克隆到表达载体pET41a中形成重组表达质粒SjTGR-pET41a。将重组表达质粒SjTGR-pET41a 和质粒pSU ABC共转化到大肠杆菌BL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达SjTGR蛋白。用阿糖胞苷-2, 5-二磷酸琼脂糖凝胶通过亲和层析从表达产物中纯化重组的SjTGR蛋白。以重组的SjTGR免疫小鼠制备TGR的多克隆血清,免疫印迹实验分析日本血吸虫体内是否存在天然的TGR。采用生物化学方法分析重组SjTGR的硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽还原酶、谷氧还蛋白的酶活性。结果 含有大肠杆菌硒代半胱氨酸插入序列的SjTGR嵌合基因构建成功。含SjTGR基因的重组质粒SjTGR-pET41a的转化子细菌在静止生长期,经IPTG诱导,24 ℃培养24 h可表达出可溶性SjTGR蛋白,质粒pSU ABC表达产物可促进硒代半胱氨酸整合,增加硒蛋白的产量。免疫印迹实验结果显示,纯化重组SjTGR多克隆抗体可以识别血吸虫成虫体内天然的TGR。生化分析结果显示,SjTGR是一种具有硫氧还蛋白还原酶、谷胱甘肽还原酶、谷氧还蛋白活性的多功能酶。结论 具有生物活性的SjTGR已被成功表达,为进一步研究其功能与应用价值奠定了基础。
中图分类号: