中国血吸虫病防治杂志 ›› 2007, Vol. 19 ›› Issue (4): 252-256.
贾人初1|孙毅.刘金明孙|苑纯秀2|傅志强2|石耀军2|陆珂2|孙焕2|李浩2|蔡幼民2|林矫矫2
 |Jia Ren-chu, Sun Yi, |Liu Jin-ming, Yuan. Chun-xiu, Fu Zhi-qiang, Shi Yao-jun, Lu Ke, Sun. Huan, Li Hao,Cai You-min, Lin. Jiao-jiao
摘要:
目的构建东方田鼠肺脏T7噬菌体展示cDNA文库,为筛选东方田鼠抗血吸虫感染抗性相关基因奠定基础。方法 用TRIzol试剂提取东方田鼠肺脏总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA。在双链cDNA末端加上定向EcoR I/HindⅢ接头并用EcoR I和HindⅢ消化,使其两端分别带EcoR I和HindⅢ黏性末端。用Mini Column纯化,收集300 bp以上的双链cDNA片段,再连接于带有EcoR I和Hind Ⅲ末端的T7 Select 10-3b载体,经体外包装后,以BLT5403为受体菌构建T7噬菌体展示cDNA文库。结果 经测定,库容量为1.5×106 pfu,扩增后文库滴度为1.1×1012pfu/ml。对从原始文库中随机挑取的100个噬菌斑进行PCR签定,重组率为91%,阳性克隆片段长度分布在200-1 500 bp,其中有90%的插入片段>300 bp。结论成功构建了东方田鼠肺脏T7噬菌体展示cDNA文库。
中图分类号: