中国血吸虫病防治杂志 ›› 2007, Vol. 19 ›› Issue (3): 170-174.
王文琴|李小红.|刘述先|宋光承|徐裕信|曹建平
Wang Wen-qin. Li Xiao-hong', Liu Shu-xian', Song Guang-cheng', Xu Yu-xin', Cao Jian-ping
摘要:
目的 克隆、表达日本血吸虫(大陆株)3-磷酸甘油醛脱氢酶(SjcGAPDH)编码基因并作结构预测。方法 将编码SjcGAPDH的pBluescript质粒用限制性内切酶Xho I和Sac I消化后,收集目的片段,与经同样酶切的原核表达载体pET28b连接,筛选重组克隆并测序,将正确的重组质粒转入BL21(DE3)感受态细菌,异丙基-p硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白。用GeneRunner软件对该蛋白的结构及抗原表位进行预测。结果 十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察到大小约42.7 kDa的特异性蛋白条带,与预计一致。免疫印迹试验(Western blot)结果表明致弱尾蚴免疫兔血清可识别该重组蛋白。结构预测表明SjcGAPDH的第50~70、102~122、135~148、165~175、187~205、254~272、278—285位氨基酸区域可能为蛋白质的抗原优势区域。结论 SjcGAPDH编码基因克隆、表达获得成功,为开展该分子功能和免疫原性研究奠定了基础,对GAPDH的结构和性质预测为探索该蛋白的抗原优势表位提供了理论依据。
中图分类号: