中国血吸虫病防治杂志 ›› 2016, Vol. 28 ›› Issue (4): 381-387.DOI: 10.16250/j.32.1374.2016111
谢郁|廖海燕△|陈淑洁|石玲玉|欧丽妍|滕萍英|夏丹|陈启伟|郑斯楠|周晓红*
XIE Yu|LIAO Hai-yan△|CHEN Shu-jie|SHI Ling-yu|OU Li-yan|TENG Ping-ying|XIA Dan|CHEN Qi-wei|ZHENG Si- nan|ZHOU Xiao-hong*
摘要: 目的 目的 克隆、 鉴定日本血吸虫热休克因子 (Sj?hsf), 并分析其基因结构特征和可变剪切亚型。方法 方法 以日本血 吸虫尾蚴感染新西兰白兔, 42 d后剖杀, 以灌注法收集雌虫、 雄虫及感染兔肝脏, 以Trizol法提取总RNA。以RT?PCR扩 增日本血吸虫雌虫、 雄虫、 虫卵总RNA, 获得Sj?hsf 开放阅读框 (ORF) 全长片段和Sj?hsf 可变剪切区域片段, 并进行克隆、 酶切及测序鉴定。用DNAMAN 8.0、 InterPro、 Mega 6结合日本血吸虫和曼氏血吸虫基因组数据库以及GenBank等网络分 析平台, 分析Sj?hsf的基因结构特征、 功能结构域、 可变剪切模式以及不同物种间HSF序列的同源性和进化树。结果 结果 自 雌虫、 雄虫、 虫卵扩增获得靶片段, 并克隆获得阳性重组质粒, 其中含Sj?hsf ORF 的pBSjHSFf?F、 pBSjHSFf?M、 pBSjHSFf?E 以及含可变剪切片段的pBSjHSFs?F、 pBSjHSFs?M、 pBSjHSFs?E, 酶切及测序鉴定正确。序列分析显示Sj?hsf具有3种剪切 亚型: Sj?hsf?isoform1 (2 050 bp) 、 Sj?hsf?isoform2 (2 086 bp)、 Sj?hsf?isoform3 (2 111 bp), GenBank登录号分别为KU954546、 KX119143、 KX119144, 均位于日本血吸虫基因组SJC?S000780, 有8个外显子, 在雌虫、 雄虫和虫卵阶段3种亚型均存在, 以Sj?hsf?isoform1表达量高。Sj?HSF?isoform1 (671 aa) 、 Sj?HSF?isoform2 (683 aa) 具有HSF特征性DBD (DNA Binding Do? main)、 HR?A/B和HR?C结构域, Sj?HSF?isoform3 (282 aa)提前终止, 无HR?C结构域。进化树分析表明Sj?HSF三种剪切 亚型隶属HSF1, 与曼氏血吸虫HSF近源。结论 结论 日本血吸虫雌虫、 雄虫、 虫卵阶段均存在3种剪切亚型的HSF, 以Sj?HSF ?isoform1表达量高。本研究为进一步阐明Sj?HSF调控Sj?HSPs等应激防御体系的分子机制奠定了基础。
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