中国血吸虫病防治杂志 ›› 2015, Vol. 27 ›› Issue (3): 273-.DOI: 10.16250/j.32.1374.2015050
姜岩岩|袁忠英|徐馀信|臧炜|曹建平|王莹|尹建海|沈玉娟*
JIANG Yan-yan| YUAN Zhong-ying| XU Yu-xin|ZANG Wei|CAO Jian-ping|WANG Ying|YIN Jian-hai| SHEN Yu-juan*
摘要: 目的 目的 研究日本血吸虫新基因Sj79的结构特征及特点, 并进行RNA干扰以观察其RNAi效应, 为进一步研究其 在抗血吸虫生殖发育中的作用及机制提供依据。方法 方法 利用NCBI数据库中已公开的日本血吸虫EST序列信息对Sj79 的分子结构特征进行分析, 并对不同虫期和性别血吸虫的Sj79的mRNA表达水平进行分析, 对雌虫进行Sj79的siRNA浸 泡干扰, 干扰后采用定量PCR检测Sj79转录本相对表达水平变化。结果 结果 Sj79蛋白的开放阅读框含有696对碱基, 由一 个外显子构成。该基因具有明显的期特异性, 在雌虫中转录水平较高。siRNA片段浸泡3 d后, 低剂量 (20 nmol/L) siRNA ?1组Sj79转录本的表达水平 [(41.0 ± 12.3) %] 低于siRNA?NC组 [(103.2 ± 14.4) %], 差异有统计学意义 (t = 3.28, P < 0.05); 高剂量 (200 nmol/L) siRNA?1组 [(15.8 ± 10.9) %]、 siRNA?2组 [(11.1 ± 8.8) %] 虫体Sj79转录本的相对表达水平均 低于siRNA?NC组 [(100.1 ± 6.3) %], 差异均有统计学意义 (t = 13.44、 27.84, P均 < 0.01), 前二者对Sj79转录本的转录抑 制率可达84.2%、 88.9%。siRNA片段浸泡7 d后, 仅低剂量siRNA?1 [(43.4 ± 4.5) %]、 siRNA?2 [(62.5 ± 5.4) %] 干扰后虫体 Sj79转录本的相对表达水平低于siRNA?NC组 [(100.4 ± 5.2) %](t = 8.33、 5.07, P 均 < 0.01)。 结论 结论 本研究完善了Sj79 基因的mRNA序列和基因组信息, 了解了其结构特征, 并用siRNA干扰法筛选到了有效的siRNA?1和siRNA?2片段, 有利 于后续观察Sj79分子干扰对体外雌虫产卵的影响。
中图分类号: