中国血吸虫病防治杂志 ›› 2016, Vol. 28 ›› Issue (1): 39-44,50.DOI: :0.16250/j.32.1374.2015189
张轶静1,孙彬1,沈华飞1,吴凯2,宋丽君3,沈双3,李凯4,徐文岳4,戴洋3,林敏5,李珊1,吴万军1,郭鄂平1,李蓓1,李健1*
ZHANG Yi-jing1, SUN Bin1, SHEN Hua-fei1, WU Kai2, SONG Li-jun3, SHEN Shuang3, LI Kai4, XU Wen-yue4, DAI Yang3, LIN Min5, LI Shan1, WU Wan-jun1, GUO E-ping1, LI Bei1, LI Jian1*
摘要: 目的 目的 建立基于编码恶性疟原虫PHIST蛋白特有基因的环介导等温扩增技术。方法 方法 在PlasmoDB数据库中, 搜索并筛选编码PHIST、 在环状体或裂殖体期高表达且恶性疟原虫特有的基因。利用在线软件PrimerExplorer V4设计目 的基因LAMP引物。采集恶性疟原虫滤纸血并提取基因组DNA。将提取后的恶性疟原虫DNA用超纯水进行10?1 、 10?2 、 10?3 、 10?4 倍比稀释, 用LAMP法检测其敏感性; 采用间日疟原虫、 约氏疟原虫、 牛带绦虫和日本血吸虫基因组DNA作为对 照, 用LAMP法评价其特异性。结果 结果 共筛选出61个编码恶性疟原虫PHIST的基因。选取环状体期高表达的特有基因 PF3D7_1372300和裂殖体期高表达的特有基因PF3D7_1401600建立LAMP技术。基于PF3D7_1372300和PF3D7_ 1401600基因的LAMP法检测恶性疟原虫的最低限度分别为130.5个/μl和1 305.3个/μl, 所获得的恶性疟原虫扩增产物 其检测管染色后呈绿色, 即阳性。基于PF3D7_1372300和PF3D7_1401600基因的LAMP法扩增恶性疟原虫产物检测管 染色后呈绿色, 即阳性; 而间日疟原虫、 约氏疟原虫、 牛带绦虫和日本血吸虫的LAMP扩增产物检测管染色后仍呈棕色, 即阴性。结论 结论 基于PF3D7_1372300基因的LAMP法检测恶性疟原虫敏感、 特异、 简便、 实用, 可用于恶性疟流行区现场 调查和临床诊断。
中图分类号: