中国血吸虫病防治杂志 ›› 2012, Vol. 24 ›› Issue (2): 137-141.
李莎莎1|徐湘婷1|刘玮1|徐志鹏1|张伟伟1|李永1|董潇潇1|杨晓玮1|刘丰1|王玥珠2|王升跃2|苏川1*
Li Sha-sha1|Xu Xiang-ting1|Liu Wei1|Xu Zhi-peng1|Zhang Wei-wei1|Li Yong1|Dong Xiao-xiao1|Yang Xiao-wei1|Liu Feng1|Wang Yue-zhu2|Wang Sheng-yue2|Su Chuan1*
摘要:
目的 构建pGEX?6P?1?SjHSP40 (SjHSP40) 融合表达载体并在大肠埃希菌 (Escherich coli) 内进行原核表达及重组蛋白纯化, 以探讨SjHSP40对巨噬细胞活化的影响。方法 以PCR方法扩增SjHSP40基因片段, 将其克隆入原核表达质粒 pGEX?6P?1, 经测序验证后转化入E. coli BL21 (DE3) 中。重组蛋白经异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG) 诱导表达后以Glutathione ?Sepharose 4B亲和柱进行纯化。所得产物GST?SjHSP40进行十二烷基磺酸钠?聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS?PAGE)、 Western blot鉴定。将此融合蛋白负载巨噬细胞48 h后, 用流式细胞术检测巨噬细胞表面分子。结果 测序结果表明, 本研究成功构建了pGEX?6P?1?SjHSP40原核表达载体, 经IPTG诱导表达出融合蛋白。Western blot显示该融合蛋白能被抗GST抗体特异性识别。与GST等对照组相比, 此融合蛋白负载的巨噬细胞表面共刺激分子 (CD40、 CD80、 CD86) 及MHC Ⅱ分子表达显著上调。结论 SjHSP40可显著上调巨噬细胞表面共刺激分子 (CD40、 CD80、 CD86) 及MHC Ⅱ分子的表达, 提示其可在一定程度上使巨噬细胞活化。
中图分类号: