中国血吸虫病防治杂志 ›› 2011, Vol. 23 ›› Issue (6): 682-686.
江文才1|金小林1|沈明学1|曹汉钧1|徐祥珍1|蒋岗1|陶志勇2|高琪1*
Jiang Wen-cai1, Jin Xiao-lin1, Shen Ming-xue1, Cao Han-jun1, Xu Xiang-zhen1, Jiang Gang1, Tao Zhi-yong2, Gao Qi1*
摘要:
目的 克隆、 表达华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶 (CS?CP), 并评价其免疫学诊断效果。 方法 根据已知的CS?CP (GenBank序列号: AF093242) 基因序列设计引物, 从华支睾吸虫成虫总cDNA中扩增该目的片段, 克隆入真核表达载体 pPIC9K, 转化至巴斯德毕赤酵母 (Pichia pastoris) GS115中, 甲醇诱导表达、 纯化; 采用Western blot技术鉴定该重组蛋白; 用纯化的重组CS?CP (rCS?CP) 免疫小鼠, ELISA法检测抗体效价; 应用Dot?ELISA法和Western blot法评估该重组蛋白的诊断效果。结果 从华支睾吸虫成虫cDNA中扩增获得长度为927 bp 的CS?CP基因, 并成功进行了真核表达、 纯化, 纯化的rCS ?CP免疫小鼠后的血清能被华支睾吸虫成虫可溶性抗原识别, 其血清抗体效价达1 ∶ 64 000; 采用该重组蛋白建立的Dot? ELISA法检测华支睾吸虫病人的敏感性为91.7% (55/60), 检测正常人的特异性为97.6% (82/84); Western blot分析显示, rCS ?CP与日本血吸虫病人血清无交叉反应, 与卫氏并殖吸虫病人交叉反应率为20.0% (2/10)。结论 rCS?CP具有较好的诊断效果, 是华支睾吸虫重组蛋白中一个有潜在诊断价值的抗原。
中图分类号: