弓形虫棒状体蛋白ROP38的原核表达与鉴定

中国血吸虫病防治杂志 ›› 2016, Vol. 28 ›› Issue (5): 554-.

弓形虫棒状体蛋白ROP38的原核表达与鉴定

崔勇1|李瑾1|王洪法1|仲维霞1|孙慧1|赵桂华1|尹昆1|徐超1|肖婷1|张晓玉1|于泓2|刘学峰3|刘功振1*

1山东省医学科学院|山东省寄生虫病防治研究所（济宁272033）；2山东省临沂市平邑县畜牧局；3 山东省临沂市畜牧局

出版日期:2016-10-25 发布日期:2016-10-26
通讯作者: 刘功振
作者简介:崔勇|男|硕士|助理研究员。研究方向：弓形虫免疫诊断及分子生物学研究
基金资助:
国家自然基金青年项目（31502057、81501770）

Prokaryotic expression and identification of rhoptry protein 38 of Toxoplasma gondii

1 Shandong Academy of Medical Sciences|Shandong Institute of Parasitic Diseases|Jining 272033|China；2 Animal Husband? ry Bureau of Pingyi County；3 Animal Husbandry Bureau of Linyi City

Online:2016-10-25 Published:2016-10-26
Contact: LIU Gong?zhen

摘要/Abstract

摘要： 目的原核表达弓形虫棒状体蛋白ROP38，并对重组蛋白rROP38的反应原性进行鉴定。方法根据已发表的ROP38基因序列设计引物，通过RT?PCR方法扩增弓形虫RH株的ROP38基因。将ROP38部分基因克隆到原核表达载体pET?28a（＋）后，重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导表达并优化表达条件，SDS?PAGE分析表达情况，并通过Western blot鉴定其反应原性。结果SDS?PAGE显示在上清和包涵体均有rROP38表达，分子量约为43 kD。Western blot结果显示，rROP38蛋白能被His标签抗体和感染弓形虫的人阳性血清识别，说明ROP38具有良好的反应原性，可以作为潜在的血清学诊断抗原。结论本研究成功获得了具有良好反应原性的弓形虫重组蛋白rROP38。

关键词: 弓形虫；棒状体蛋白38；原核表达；纳虫空泡

Abstract: Objective To explore the biological function of rhoptry protein 38（ROP38）of Toxoplasma gondii，and to iden? tify the reactogenicity of the recombinant protein（rROP38）. Methods The ROP38 was amplified by RT?PCR from T. gondii RH strain，and was cloned into prokaryotic expression vector pET?28a（+）. The recombinant plasmid was transformed into E. co? li BL21（DE3）competent cells. Then the rROP38 was analyzed by SDS?PAGE and identified by Western blot. Results SDS? PAGE showed that rROP38 was efficient expression with a molecular weight of about 43 kD. Western blot showed that rROP38 reacted with antibody of His tag or human positive antibody，which indicated that ROP38 had good reactogenicity and could be a serological diagnostic antigen. Conclusion The study successfully obtains the rROP38 of T. gondii with good reactogenicity.

Key words: Toxoplasma gondii；Rhoptry protein 38（ROP38）；Prokaryotic expression；Parasitophorous vacuole（PV）

中图分类号:

R531.8

崔勇, 李瑾, 王洪法, 仲维霞, 孙慧, 赵桂华, 尹昆, 徐超, 肖婷, 张晓玉, 于泓, 刘学峰, 刘功振. 弓形虫棒状体蛋白ROP38的原核表达与鉴定[J]. 中国血吸虫病防治杂志, 2016, 28(5): 554-.

CUI Yong, LI Jin, WANG Hong-Fa, ZHONG Wei-Xia, SUN Hui, ZHAO Gui-Hua, YIN Kun, XU Chao, XIAO Ting, ZHANG Xiao-Yu, YU Hong, LIU Xue-Feng, LIU Gong-Zhen. Prokaryotic expression and identification of rhoptry protein 38 of Toxoplasma gondii[J]. Chin J Schisto Control, 2016, 28(5): 554-.

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