中国血吸虫病防治杂志 ›› 2015, Vol. 27 ›› Issue (4): 376-.DOI: 10.16250/j.32.1374.201508
陈英1|2|奥·乌力吉1|张颋2*|吴群峰2|党志胜2|陈军虎2|胡薇2
CHEN Ying1,2 |AO Wu-liji 1 |ZHANG Ting2* | WU Qun-feng2 |DANG Zhi-sheng2 | CHEN Jun-hu2 |HU Wei 2
摘要:
目的 目的 克隆表达细粒棘球绦虫丙酮酸脱氢酶 (EgPDH) 基因, 并对其进行生物信息学预测与分析。 方法 方法 提取细粒棘球绦虫Total?RNA并反转录成cDNA, 以此为模板扩增目的基因。将目的基因连接至pET28b构建重组质粒并转化大肠杆菌BL21 (DE3) 进行重组表达。采用SignalP4.1、 TMHMM sever v.2.0和TargetP1.1对EgPDH编码蛋白序列分别进行信号肽、 跨膜区及亚细胞定位的预测。采用SMART分析EgPDH编码蛋白结构域, 用BLASTP和GeneDoc进行EgPDH同源序列比对及保守位点分析, 并采用MEGA6软件邻接法构建系统进化树。 结果 结果 成功克隆并构建重组质粒pET28b? EgPDH, 目的基因大小约1 080 bp, 重组蛋白以可溶性形式表达。EgPDH为信号肽的分泌蛋白, 并含转酮酶结构域, 其高度保守酶活性位点分别为Glu57 、 Leu72 、 Ile86 、 Phe114 。系统进化树分析显示EgPDH与多房棘球绦虫PDH亲缘关系最近。 结 结论 论 成功克隆表达了细粒棘球绦虫EgPDH基因并进行了生物信息学预测分析, 为进一步研究该蛋白功能奠定了基础。
中图分类号: