中国血吸虫病防治杂志 ›› 2015, Vol. 27 ›› Issue (2): 139-.DOI: 10.16250/j.32.1374.2014234
马茜茜1|2|洪炀2|韩宏晓2|陆看2|马帅2|王涛2|刘艳涛2|韩倩2|傅志强2|陆珂2|李浩2|李祥瑞1*|林矫矫2|3*
MA Qian-qian1| 2 |HONG Yang2 |HAN Hong-xiao2 |LU Kan2 |MA Shuai 2 |WANG Tao2 |LIU Yan- tao2 |HAN Qian2 |FU Zhi - qiang2 | LU Ke 2 | LI hao2 |LI Xiang-rui 1* |LIN Jiao-jiao2| 3*
摘要: 目的 目的 了解日本血吸虫促凋亡基因SjBAD的生物学、 免疫学和转录表达特征, 评估SjBAD重组蛋白作为日本血 吸虫病疫苗候选分子的潜力。方法 方法 根据SjBAD的参考序列设计引物, 应用PCR技术扩增SjBAD基因, 构建重组表达质 粒pET?28a (+) ?SjBAD。采用实时定量PCR检测SjBAD基因在日本血吸虫不同发育期及42 d雌、 雄虫体内的转录水平; 应用Western blotting和间接ELISA法分析SjBAD重组蛋白的抗原性和免疫原性。用重组抗原SjBAD免疫BALB/c小鼠, 通过计算减虫率及肝脏减卵率, 评估重组抗原作为血吸虫病候选疫苗分子的潜力。结果 结果 成功克隆了日本血吸虫 SjBAD基因, 构建了重组表达质粒pET?28a (+) ?SjBAD, 并在大肠杆菌中成功表达, 重组蛋白分子量约为22 kDa。Western blotting表明SjBAD具有较好的抗原性和免疫原性, 间接ELISA法检测表明重组蛋白免疫小鼠产生了高水平的特异性抗 体IgG。实时定量PCR检测发现SjBAD基因在日本血吸虫的各个发育阶段均有转录, 以14 d表达量最高, 且在雄虫体内 的表达量高于雌虫。两次动物免疫试验表明, 重组蛋白SjBAD在BALB/c小鼠体内诱导了30.82%和27.87%的减虫率, 及 42.52%和45.84%的肝脏虫卵减少率, 均显著高于PBS对照组 (P 均< 0.05)。结论 结论 成功克隆、 表达了日本血吸虫促凋亡 相关基因SjBAD, 该基因在日本血吸虫不同发育期虫体内均有表达。纯化的重组SjBAD蛋白在小鼠体内能诱导产生部 分抗血吸虫感染的免疫保护效果。
中图分类号: