中国血吸虫病防治杂志 ›› 2023, Vol. 35 ›› Issue (2): 155-.
张晨烁1,黄磊2,唐瑜1,王朋1,陈亚澜1,张柳1,沈海娥1,余源1,田喜凤1,王洋1*
ZHANG Chenshuo1, HUANG Lei2, TANG Yu1, WANG Peng1, CHEN Yalan1, ZHANG Liu1, SHEN Hai’e1, YU Yuan1, TIAN Xifeng1, WANG Yang1*
摘要: 目的 鉴定并验证α⁃11贾第素的相互作用蛋白,为其功能研究提供实验依据。方法 构建C2株蓝氏贾第鞭毛虫酵母双杂交cDNA文库和α⁃11贾第素诱饵质粒,通过酵母双杂交筛选出可能与α⁃11贾第素相互作用的蛋白。将α⁃11贾第素和筛选出的可能互作蛋白基因分别构建入pBiFc⁃Vc⁃155、pBiFc⁃Vn⁃173质粒,共转染乳腺癌细胞系MDA⁃MB⁃231,通过双分子荧光互补(bimolecular fluorescent complementation, BiFC)实验验证两种蛋白的相互作用。结果 构建了库容为2.715 × 107 细菌菌落总数(CFU)的蓝氏贾第鞭毛虫酵母双杂交cDNA文库和含有α⁃11贾第素基因的无自激活活性的诱饵质粒。通过酵母双杂交两轮阳性筛选,共筛选出6个可能与α⁃11贾第素相互作用的蛋白,分别为真核翻译起始因子5A(eukaryotic translation initiation factor 5A,EIF5A)、钙调蛋白激酶(calmodulin⁃dependent protein kinase,CAMKL)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸特异性谷氨酸脱氢酶(NADP⁃specific glutamate dehydrogenase, NADP⁃GDH)、假设蛋白1(GL50803_95880)、假设蛋白2 (GL50803_87261)和一段来自犬贾第虫病毒的蛋白。成功将α⁃11贾第素基因与EIF5A基因分别转入BiFc系统质粒pBiFc⁃Vc⁃155与pBiFc⁃Vn⁃173,将矫正突变的pBiFc⁃Vc⁃155⁃α⁃11与pBiFc⁃Vn⁃173⁃EIF5A重组质粒共转染MDA⁃MB⁃231细胞后,镜下观察可见绿色荧光,证实α⁃11贾第素与EIF5A蛋白在细胞内存在相互作用。结论 成功构建了C2株蓝氏贾第鞭毛虫酵母双杂交文库,并鉴定出6个α⁃11贾第素可能的相互作用蛋白,其中EIF5A与α⁃11贾第素在细胞内存在相互作用。
中图分类号: