中国血吸虫病防治杂志 ›› 2018, Vol. 30 ›› Issue (2): 184-188.
马荣1| 2|肖婷1|李瑾1|孙慧1|徐超1|黄炳成1|尹昆1|赵桂华1|崔勇1|朱嵩1|刘功振1|闫歌1*|魏庆宽1*
MA Rong1|2| XIAO Ting1| LI Jin1| SUN Hui1| XU Chao1| HUANG Bing-cheng1| YIN Kun1| ZHAO Gui-hua1| CUI Yong1| ZHU Song1| LIU Gong-zhen1| YAN Ge1*| WEI Qing-kuan1*
摘要: 目的 构建pEGFP?N1?HBsAg?ROP2重组质粒,并转染HEK293T细胞进行表达鉴定,为弓形虫病核酸疫苗的研制奠定基础。 方法 根据HBsAg基因序列和pcDNA3?p30?ROP2重组质粒酶切位点设计引物,PCR扩增HBsAg基因,经酶切、连接、转化,利用HBsAg基因替换p30基因,构建pcDNA3?HBsAg?ROP2重组质粒;经HindⅢ和KpnⅠ双酶切,将HBsAg?ROP2片段与pEGFP?N1真核表达载体相连,构建pEGFP?N1?HBsAg?ROP2重组表达质粒,转染HEK293T细胞,观察其蛋白表达水平。结果 HBsAg片段PCR产物约700 bp,与理论值相符;构建pcDNA3?HBsAg?ROP2重组质粒,双酶切电泳后得到约5.4 kb和1.9 kb的两条带,与预期结果相符。pEGFP?N1?HBsAg?ROP2双酶切后产生约4.7 kb和1.9 kb的条带,经测序鉴定,与GenBank发表的序列同源性为99.84%。目的基因已成功转染入HEK293T细胞中,且正确表达,蛋白浓度为3.08 mg/ml。结论 成功构建pEGFP? N1?HBsAg?ROP2重组表达质粒,转染HEK293T细胞能正确表达。
中图分类号: