中国血吸虫病防治杂志 ›› 2020, Vol. 32 ›› Issue (4): 345-.
倪碧娴1,2,刘燕红3,徐祥珍1,2,王晓婷1,2,吴小珉1,2,应清界3,曹俊1,2,戴洋1,2*
NI Bi-Xian1, 2, LIU Yan-Hong3, XU Xiang-Zhen1, 2, WANG Xiao-Ting1, 2, WU Xiao-Min1, 2, YING Qing-Jie3, CAO Jun1,2, DAI Yang1,2*
摘要: 目的 建立基于重组酶介导的等温扩增技术(RAA)的蓝氏贾第鞭毛虫核酸检测方法,并评价其检测敏感性和特异性。方法 选择蓝氏贾第鞭毛虫β?贾第素(β?giardin)基因作为检测靶基因,设计、合成特异性检测引物及荧光探针,建立荧光RAA检测体系。分别以不同拷贝数的重组质粒(含β?giardin基因靶序列)和不同浓度蓝氏贾第鞭毛虫基因组DNA为模板进行荧光RAA扩增,评价其检测敏感性;分别以蓝氏贾第鞭毛虫、日本血吸虫、华支睾吸虫、微小隐孢子虫、似蚓蛔线虫、沙门氏菌及志贺氏菌基因组DNA为模板进行扩增,评价其检测特异性。结果 成功建立了蓝氏贾第鞭毛虫荧光RAA检测方法,其可在等温(39 ℃)条件下实现对靶基因片段的快速、特异性扩增(20 min内)。分别以重组质粒和蓝氏贾第鞭毛虫基因组DNA为模板,该方法的检测敏感性可达102拷贝/μL和1 pg/μL;以日本血吸虫、华支睾吸虫、微小隐孢子虫、似蚓蛔线虫、沙门氏菌及志贺氏菌基因组DNA为模板的RAA检测结果均为阴性,具备较好特异性。结论 建立了一种操作简便、敏感、特异的可用于蓝氏贾第鞭毛虫核酸检测的荧光RAA方法。
中图分类号: