中国血吸虫病防治杂志 ›› 2020, Vol. 32 ›› Issue (3): 262-.
余艳雄,李莎莎,朱继峰,陈晓军,徐志鹏,李娅琳,周莎*,苏川*
YU Yan-Xiong, LI Sha-Sha, ZHU Ji-Feng, CHEN Xiao-Jun, XU Zhi-Peng, LI Ya-Lin, ZHOU Sha*, SU Chuan*
摘要: 目的 探索日本血吸虫热休克蛋白40 kDa(SjHSP40)免疫学功能。方法 采用生物信息学方法分析SjHSP40蛋白序列同源性,并预测其B细胞及T细胞表位。应用PCR技术扩增全长SjHSP40基因,将其克隆入原核表达质粒pGEX?6P?1,再转入大肠埃希菌BL21中;以异丙基?β?D?硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,再经亲和柱分离纯化获得谷胱甘肽巯基转移酶(GST)?SjHSP40融合蛋白,分别采用十二烷基磺酸钠?聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS?PAGE)及Western blotting进行鉴定。以GST?SjHSP40免疫BALB/c小鼠后,以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清中抗SjHSP40特异性IgG抗体及其亚型IgG1、IgG2a抗体,采用流式检测术观察SjHSP40对CD4+ T细胞亚群分化的影响。结果 SjHSP40含有7个潜在B细胞表位及多个T细胞表位(CTL表位和Th表位)。成功构建了原核表达重组质粒pGEX?6P?1?SjHSP40,并通过诱导表达和蛋白纯化获得GST?SjHSP40融合蛋白。与其他组相比,GST?SjHSP40免疫小鼠血清中抗SjHSP40特异性IgG抗体及其亚型IgG1和IgG2a水平均显著升高,但SjHSP40对CD4+ T淋巴细胞分化无显著影响。结论 SjHSP40可诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,但不影响小鼠体内各类Th免疫反应平衡,可作为潜在疫苗候选分子。
中图分类号: