• 论著 •
马茜茜1|2|洪炀2|韩宏晓2|陆看2|马帅2|王涛2|刘艳涛2|韩倩2|傅志强2|陆珂2|李浩2|李祥瑞1*|林矫矫2|3*
MA Qian-qian1|2|HONG Yang2|HAN Hong-xiao2|LU Kan2|MA Shuai2|Wang Tao2|LIU Yan- tao2|HAN Qian2|FU Zhi-qiang2|LU Ke2|LI Hao2|LI Xiang?rui1*|LIN Jiao-jiao2|3*
摘要:
目的 了解日本血吸虫促凋亡基因SjBAD的生物学、免疫学和转录表达特征,评估SjBAD重组蛋白作为日本血吸虫病疫苗候选分子的潜力。方法 根据SjBAD的参考序列设计引物,应用PCR技术扩增SjBAD基因,构建重组表达质粒pET?28a(+)?SjBAD。采用实时定量PCR检测SjBAD基因在日本血吸虫不同发育期及42 d雌、雄虫体内的转录水平;应用Western blotting和间接ELISA法分析SjBAD重组蛋白的抗原性和免疫原性。将重组抗原SjBAD免疫BALB/c小鼠,通过计算减虫率及肝脏减卵率,评估重组抗原作为血吸虫病候选疫苗分子的潜力。结果 成功克隆了日本血吸虫SjBAD基因,构建了重组表达质粒pET?28a(+)?SjBAD,并在大肠杆菌中成功表达,重组蛋白分子量约为22 kDa。Western blotting表明SjBAD具有较好的抗原性和免疫原性,间接ELISA法检测表明重组蛋白免疫小鼠产生了高水平的特异性抗体IgG。实时定量PCR检测发现SjBAD基因在日本血吸虫的各个发育阶段均有转录,以14 d表达量最高,且在雄虫体内的表达量高于雌虫。两次动物免疫试验表明,重组蛋白SjBAD在BALB/c小鼠体内诱导了30.82%和27.87%的减虫率,及42.52%和45.84%的肝脏虫卵减少率,均显著高于PBS对照组(P 均< 0.05)。结论 成功克隆、表达了日本血吸虫促凋亡相关基因SjBAD,该基因在日本血吸虫不同发育期虫体内均有表达。纯化的重组SjBAD蛋白在小鼠体内能诱导产生部分抗血吸虫感染的免疫保护效果。
中图分类号: