中国血吸虫病防治杂志 ›› 2019, Vol. 31 ›› Issue (5): 468-.
张强1, 2,丁昕1, 2,吴小珉1, 2,刘燕红3,刘剑峰1, 2,徐祥珍1, 2,应清界3,曹俊1, 2,戴洋1, 2*
ZHANG Qiang1, 2, DING Xin1, 2, WU Xiao-Min1, 2, LIU Yan-Hong3, LIU Jian-Feng1, 2, XU Xiang-Zhen1, 2, YING Qing-Jie3, CAO Jun1, 2, DAI Yang1, 2*
摘要: 目的 建立一种可用于华支睾吸虫检测的重组酶介导的等温核酸扩增方法(RAA)。方法 以华支睾吸虫18S rRNA基因序列作为靶序列,设计、合成、筛选特异性引物和探针,建立快速检测华支睾吸虫的荧光RAA检测方法。分别以含不同拷贝数DNA片段的重组质粒和不同浓度华支睾吸虫基因组DNA为模板进行荧光RAA扩增,评价其检测敏感性;分别以似蚓蛔线虫、细粒棘球绦虫、日本血吸虫、十二指肠钩虫、曼氏血吸虫基因组DNA为模板进行荧光RAA扩增,评价其检测特异性;通过抽提含华支睾吸虫虫卵的粪便及含囊蚴的淡水鱼肉样本DNA并进行荧光RAA扩增,初步评价其检测现场样本的能力。结果 成功建立了华支睾吸虫检测荧光RAA法,其可在39 ℃ 20 min内实现对华支睾吸虫DNA的特异性扩增。以含不同拷贝数DNA片段的重组质粒为模板,该方法最低检出限为10 拷贝/μL;以不同浓度华支睾吸虫基因组DNA为模板,该方法最低检出限为3 pg/μL;以似蚓蛔线虫、细粒棘球绦虫、日本血吸虫、十二指肠钩蚴及曼氏血吸虫基因组DNA为模板,检测结果均为阴性。该方法可成功检出感染华支睾吸虫的人体、大鼠粪便样本以及麦穗鱼样本,具备较好的现场样本检测能力。结论 成功建立了一种简便、快速、敏感、特异的可用于华支睾吸虫检测的RAA法。
中图分类号: